蛇床子探針法PCR鑒定試劑盒説明手冊

本產品僅供科研，不得做其它用途

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本產品就是根據PCR原理專門開發的試劑盒，它具有下列特點：

1. 即開即用，用戶只需要提供樣品DNA模板。

2. 提供陽性對照，便于區分假陰性樣品。

3. 產品精心優化且特異性高，引物是根據高度保守區設計，不會跟除此之外的其它微生物DNA發生交叉反應。

4. PCR mix中含上樣染料，PCR后可以直接上樣電泳。

5. 本產品足夠50次20μL體系的PCR反應。

6. 本產品只能用于定性實驗，不能用于定量。

7. 本產品只能用于科研

蛇床子探針法PCR鑒定試劑盒説明手冊樣品的制備　

【試劑盒組成】

【儲存條件及有效期】避光-20℃以下保存，避免反復凍融，有效期12個月。

【適用儀器】 ABI7500、羅氏 96/480、安捷倫、伯樂、國產博日、宏石等各種熒光定量 PCR 儀。

【樣本要求】

1.血液或血清樣品：使用無菌注射液抽取樣品置于離心管中待檢。

2.肌肉或內臟樣品：取少量樣品（2～3克）于研缽或勻漿器中研磨，然后將研磨勻漿轉入無菌離心管中，3000rpm/min 離心10分鐘取上清待檢。

3.應避免標本間交叉污染。

4.標本收集后可立即檢測；若不能立即檢測，可置于2～8℃冷藏過夜保存；如需長期保存，標本應凍存于-80℃以下，避免反復凍融。

使用方法：

一、稀釋標準曲線樣品（以 10E1-10E6 拷貝/μL 這 6 個 10 倍稀釋度為例）。

由于標準品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨立的區域進行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分。為增加產品穩定性和避免擴散傳染性病原，本產品不提供活體樣品做陽性對照，只提供無傳染性的 DNA 片段作為陽性對照。

1. 標記 6 個離心管，分別為 6，5，4，3，2，1。

2. 用帶芯槍頭分別加入 45μL 熒光 PCR 專用模板稀釋液，最好用帶芯槍頭，下同。

3. 在 6 號管中加入 5μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照(試劑盒提供)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E6 拷貝/μL 的標準曲線樣品。放冰上待用。

4. 換槍頭，在 5 號管中加入 5μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E5 拷貝/μL 的標準曲線樣品。放冰上待用。

5. 換槍頭，在 4 號管中加入 5μL 1×10E5 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E4 拷貝/μL 的標準曲線樣品。放冰上待用。

6. 重復上面的操作直到得到 6 個稀釋度的標準曲線樣品。放冰上待用。

檢驗方法的局限性】

1.當檢測樣本中被檢核酸濃度低于本試劑盒檢出可能會發生假陰性的結果。

2.被檢樣本在采集、運輸、儲存以及處理過程中操作方式不當容易造成RNA降解而產生假陰性結果。

3.樣本在采集、運輸、儲存以及處理過程中發生交叉污染，則容易得到假陽性結果。

【注意事項】

1.使用本試劑盒的實驗室，應嚴格按照國家有關部分頒布的有關基因擴增檢驗實驗室管理規范進行管理；

2.為避免RNA降解，樣本處理過程應在0-4℃條件下操作，且完成實驗后立即上機檢測；樣本處理過程中使用的器具耗材應經過無核酶處理；

3.各區域物品均為專用，不得交叉使用，以免污染；檢測結束后，應立即對工作臺清潔；

4.吸取反應液時，應盡量避免產生氣泡；上 PCR 儀前，應注意檢查各反應管是否蓋緊，以免液體蒸發造成結果不準確；

5.試劑盒所有試劑在使用前應該在常溫下充分融化混勻，并應瞬時離心；

6.試劑盒內所配陰性和陽性對照在第一次使用前應全部轉移至標本準備區，并單獨存放；

7.為防止熒光干擾，應避免裸手直接接觸PCR反應管，并應避免在PCR反應管上進行任何標記；

8.檢測過程中使用過的吸頭，應直接打到盛有 10%次氯酸的廢物缸內，檢測結束的PCR 反應管，切忌開蓋，并與其他廢棄物品一同滅菌后丟棄；工作臺及各種實驗用品應定期用 10%次氯酸、75%酒精或紫外燈進行消毒；

9.儀器擴增相關參數應按照本說明書相關要求進行設置；不同批號試劑不能混用；并在有效期內使用。

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