蝦堿性磷酸酶（SAP）試劑

蝦堿性磷酸酶（SAP）試劑（Shrimp Alkaline Phosphatase,SAP)催化DNA和RNA 的5’和3’磷酸單脂的去磷酸化反應，也可水解核糖和

脫氧核糖核苷三磷酸（NTP 和 dNTP）。蝦堿性磷酸酶在分子生物學研究中應用廣泛，如去除DNA和RNA 末端的磷酸基團，

用于后續的克隆和探針末端標記。在克隆中，可使線性載體去磷酸化，防止自連。蝦堿性磷酸酶在65°C溫育5分鐘即可的、

不可逆的失活，因此，在連接或末端標記之后，可以不用去除熱敏磷酸酶?；谝陨咸匦?，該酶是傳統去磷酸化酶--小牛腸堿性

磷酸酶（CIP）的替代物。

組分

組分名稱500U

rSAP (2 U/μl)250 μl

10×SAP Buffer1 ml

應用

DNA 和 RNA 的去磷酸化

防止克隆載體的自連

制備5′末端標記模板

活性定義

1單位指在37°C條件下，每分鐘水解1umol的pNPP（p-Nitrophenyl Phosphate）到pNP所需要的酶量。

儲存

-20℃可保存2年。

蝦堿性磷酸酶（SAP）試劑恒溫擴增使用策略及實例展示

應用實例1：在以A3824-03或 A3828-03，用 LP1002引物組進行的LAMP測試。Bst4.0 SYBR Green試劑可在標準定量PCR儀或恒溫熒光儀上進行反應。以體外轉錄RNA為模板，1-6分別為1、10、100、1000、10e4和10e6Copies，NTC為ddH2O為模板。下圖為65℃反應25min的檢測結果，可以看到檢測反應<20min(達平臺期)。

應用實例2： 用 LP1002引物組進行的LAMP測試。OG變色法為終點變色策略，在反應結束后，倒置反應管，溶解管蓋上染料后，陽性樣本呈現出醒目的綠色，陰性表現出橙色，區分明顯。且該方法不受樣本類型限制，雜質耐受性很好。以體外轉錄RNA為模板，1-6分別為1、10、100、1000、10e4和10e6Copies，NTC為ddH2O為模板。下圖為65℃反應20min后檢測結果。

應用實例3：A3825-01 紅黃變色反應（肉眼觀察）

以 體外轉錄 RNA 為模板，1-6分別為1、10 、100、1000、104和106Copy，NTC為ddH2O為模板。 上圖為加樣結束反應起

始前，下圖為 65 度反應 30min 后。

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