Lambda核酸外切酶試劑

Lambda核酸外切酶試劑作用于雙鏈DNA，沿 5′→3′方向逐步切去5′單核苷酸。最適底物是5′磷酸化的雙鏈 DNA，

也能緩慢降解單鏈DNA和非磷酸化底物。該酶不能從DNA 的切刻或缺口處起始消化。

組分

名稱數(shù)量

Lambda Exonuclease (5 U/μl)200 μl/1 ml

10×Lambda Exo Buffer1 ml/1 ml×5

單位定義

1單位指在50μl反應(yīng)體系中，37℃條件下，30分鐘內(nèi)能從雙鏈DNA底物上催化產(chǎn)生10 nmol 酸溶性脫氧核糖核苷酸所需的酶量。

儲存

置于-20°C，可保存3年。

使用注意事項(xiàng)

1. 1×Lambda Exo Buffer：67 mM Glycine-KOH（pH 9.4 @ 25℃），2.5 mM MgCl2，50μg/ml BSA，37℃溫育。

2. 該酶的最佳反應(yīng)溫度為37°C，75°C 10min可失活。

3. 5′-0H端的切割速度比5′-PO4端慢20倍。單鏈DNA 比雙鏈DNA慢100倍。

50℃，5min。

Lambda核酸外切酶試劑恒溫?cái)U(kuò)增使用策略及實(shí)例展示

應(yīng)用實(shí)例1：在以A3824-03或 A3828-03，用 LP1002引物組進(jìn)行的LAMP測試。Bst4.0 SYBR Green試劑可在標(biāo)準(zhǔn)定量PCR儀或恒溫?zé)晒鈨x上進(jìn)行反應(yīng)。以體外轉(zhuǎn)錄RNA為模板，1-6分別為1、10、100、1000、10e4和10e6Copies，NTC為ddH2O為模板。下圖為65℃反應(yīng)25min的檢測結(jié)果，可以看到檢測反應(yīng)<20min(達(dá)平臺期)。

應(yīng)用實(shí)例2： 用 LP1002引物組進(jìn)行的LAMP測試。OG變色法為終點(diǎn)變色策略，在反應(yīng)結(jié)束后，倒置反應(yīng)管，溶解管蓋上染料后，陽性樣本呈現(xiàn)出醒目的綠色，陰性表現(xiàn)出橙色，區(qū)分明顯。且該方法不受樣本類型限制，雜質(zhì)耐受性很好。以體外轉(zhuǎn)錄RNA為模板，1-6分別為1、10、100、1000、10e4和10e6Copies，NTC為ddH2O為模板。下圖為65℃反應(yīng)20min后檢測結(jié)果。

應(yīng)用實(shí)例3：A3825-01 紅黃變色反應(yīng)（肉眼觀察）

以 體外轉(zhuǎn)錄 RNA 為模板，1-6分別為1、10 、100、1000、104和106Copy，NTC為ddH2O為模板。 上圖為加樣結(jié)束反應(yīng)起

始前，下圖為 65 度反應(yīng) 30min 后。

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