Hi T7 RNA Polymerase試劑

Hi T7 RNA Polymerase試劑 聚合酶對T7噬菌體啟動子具有高度的特異性，并可以其作為啟動子，DNA作為模板體外合成正義鏈RNA。線性質(zhì)粒、PCR產(chǎn)物雙鏈DNA均可作為T7 RNA 聚合酶的底物模板。Hi T7 RNA聚合酶經(jīng)電子重構(gòu)架及庫篩選，與Wild型相比，該酶的DNA模板結(jié)合區(qū)域親和力更高，使其具有持續(xù)合成能力，從而獲得更高的產(chǎn)量，并易于長片段RNA的合成。

Hi T7高產(chǎn)RNA合成試劑盒是基于Hi T7 RNA聚合酶而組建的試劑盒，20 μl反應(yīng)即可獲得150-200 μg的總產(chǎn)量（產(chǎn)量超過 MegaScript T7 Transcription kit）。利用該高產(chǎn)RNA試劑盒可在體外高效合成多種類型的 RNA，如mRNA、lncRNA、shRNA等。Hi T7 RNA聚合酶識別T7 promoter（TAATACGACTCA CTATA G G）以倒數(shù)第二個G堿基為起點開始轉(zhuǎn)錄，轉(zhuǎn)錄長度可達5000nt以上。利用該試劑盒得到的RNA適用于多種下游應(yīng)用，如RNA結(jié)構(gòu)和功能研究、核酸酶生物化學(xué)研究、RNase保護分析探針、印跡雜交、反義 RNA 及 RNAi 實驗、微陣列分析、顯微注射、體外翻譯和 RNA 疫苗等。

應(yīng)用

制備放射標記的 RNA 探針

合成用于體外翻譯的 RNA

合成用于結(jié)構(gòu)、加工和催化性能研究的 RNA

合成 RNA 反義鏈，調(diào)控基因表達

1X T7 Transcription Buffer

40 mM Tris (pH 7.8), 10 mM NaCl, 6mM MgCl2,2 mM Spermidine HCl, 10 mM DTT 。

酶儲存液

10 mM Tris-HCl, 0.1 M NaCl, 1 mM DTT, 0.1 mM EDTA, 50% Glycerol, 0.01% (w/v) Triton X-100 , pH 7.5。

儲存

-20°C可保存2年，避免反復(fù)凍融。

熱失活

75°C，10min。

Hi T7 RNA Polymerase試劑 恒溫擴增使用策略及實例展示

應(yīng)用實例1：在以A3824-03或 A3828-03，用 LP1002引物組進行的LAMP測試。Bst4.0 SYBR Green試劑可在標準定量PCR儀或恒溫熒光儀上進行反應(yīng)。以體外轉(zhuǎn)錄RNA為模板，1-6分別為1、10、100、1000、10e4和10e6Copies，NTC為ddH2O為模板。下圖為65℃反應(yīng)25min的檢測結(jié)果，可以看到檢測反應(yīng)<20min(達平臺期)。

應(yīng)用實例2： 用 LP1002引物組進行的LAMP測試。OG變色法為終點變色策略，在反應(yīng)結(jié)束后，倒置反應(yīng)管，溶解管蓋上染料后，陽性樣本呈現(xiàn)出醒目的綠色，陰性表現(xiàn)出橙色，區(qū)分明顯。且該方法不受樣本類型限制，雜質(zhì)耐受性很好。以體外轉(zhuǎn)錄RNA為模板，1-6分別為1、10、100、1000、10e4和10e6Copies，NTC為ddH2O為模板。下圖為65℃反應(yīng)20min后檢測結(jié)果。

應(yīng)用實例3：A3825-01 紅黃變色反應(yīng)（肉眼觀察）

以 體外轉(zhuǎn)錄 RNA 為模板，1-6分別為1、10 、100、1000、104和106Copy，NTC為ddH2O為模板。 上圖為加樣結(jié)束反應(yīng)起

始前，下圖為 65 度反應(yīng) 30min 后。

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