Bsu DNA聚合酶 大片段試劑

Bsu DNA聚合酶 大片段試劑聚合酶是具有鏈置換活性的DNA恒溫擴增聚合酶，主要應用于RPA重組酶擴增。重組酶UvsX與引物結合形成的蛋白-DNA復合物，能在雙鏈DNA中尋找同源序列；一旦引物定位了同源序列，就會發生鏈交換反應，Bsu DNA聚合酶啟動DNA合成，對模板上的目標區域進行指數式擴增。被替換的DNA鏈與SSB結合，防止進一步替換。

本Bsu DNA 聚合酶來源于 嗜熱脂肪芽孢桿菌（Bacillus subtilis），系將Bacillus subtilis DNA 聚合酶（Bsu） I 基因的前296個AA截去而得。該酶保留了Bsu I 的 5′-3′ 聚合酶活性，但是缺失了 5′-3′ 核酸外切酶結構域，該酶自身缺失 3′-5′ 核酸外切酶活性，可用于重組酶擴增。

應用

隨機引物法標記

cDNA 第二條鏈的合成

單個 dA 的加尾

鏈置換的 DNA 合成

活性定義

在37℃條件下，30min內參入10nmol酸性不容物定義為1個活性單位。

Bsu DNA聚合酶 大片段試劑聚恒溫擴增使用策略及實例展示

應用實例1：在以A3824-03或 A3828-03，用 LP1002引物組進行的LAMP測試。Bst4.0 SYBR Green試劑可在標準定量PCR儀或恒溫熒光儀上進行反應。以體外轉錄RNA為模板，1-6分別為1、10、100、1000、10e4和10e6Copies，NTC為ddH2O為模板。下圖為65℃反應25min的檢測結果，可以看到檢測反應<20min(達平臺期)。

應用實例2： 用 LP1002引物組進行的LAMP測試。OG變色法為終點變色策略，在反應結束后，倒置反應管，溶解管蓋上染料后，陽性樣本呈現出醒目的綠色，陰性表現出橙色，區分明顯。且該方法不受樣本類型限制，雜質耐受性很好。以體外轉錄RNA為模板，1-6分別為1、10、100、1000、10e4和10e6Copies，NTC為ddH2O為模板。下圖為65℃反應20min后檢測結果。

應用實例3：A3825-01 紅黃變色反應（肉眼觀察）

以 體外轉錄 RNA 為模板，1-6分別為1、10 、100、1000、104和106Copy，NTC為ddH2O為模板。 上圖為加樣結束反應起

始前，下圖為 65 度反應 30min 后。

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