RAPA3G DNA Polymerase試劑

RAPA3G DNA Polymerase試劑為第三代DNA聚合酶，具有5'-3'外切酶活性，不具有3'-5’外切酶活性，其具有最高的雜質(zhì)耐受性（對(duì)乙醇、胍鹽、肝素具有

的耐受性），因此對(duì)于純度較差的DNA模板，該酶仍然可以獲得理想的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

RAPA3G DNA聚合酶為化學(xué)法修飾的HotStart版本，其在50℃以下100%無活性，只有95℃條件下加熱5min后才能恢復(fù)酶的

活力。因此該系統(tǒng)可以有效抑制非特異性PCR擴(kuò)增，極大的提高了PCR擴(kuò)增特異性和靈敏度。該酶配有的反應(yīng)緩沖液，

可在寬范圍中得到良好的擴(kuò)增結(jié)果、檢測(cè)靈敏度更高、信號(hào)更強(qiáng)。

主要特征

快速擴(kuò)增：具有6kb/min的擴(kuò)增能力，1kb片段可在25min內(nèi)完成擴(kuò)增.

雜質(zhì)高耐受性：全血、血清、培養(yǎng)細(xì)胞、尿液等樣本直接進(jìn)行PCR擴(kuò)增，無需核酸純化。

高特異性：采用HaiGene專有熱啟動(dòng)技術(shù)，50°C以下無活性，僅有95°C加熱5min才能恢復(fù)酶活。

長(zhǎng)片段擴(kuò)增：質(zhì)粒、λ DNA 等簡(jiǎn)單模板可以有效擴(kuò)增>20 kb，基因組可以有效擴(kuò)增>8 kb，cDNA可以有效擴(kuò)增>8kb。

組分

組分名稱1000U

HotStart RAPA3G DNA Polymerase (10U/μl)100 μl

5×HotStart RAPA3G Buffer1 mlx4

100mM Mg2+1 ml

RAPA3G DNA聚合酶對(duì)抑制物耐受性

SDS0.01%胍鹽0.25%

乙醇5%全血15%

肝素0.1IU/ml血清15%

Trizol0.5%血漿2%

血紅蛋白30μM尿液5%

50μl體積建議添加的樣品量

抗凝全血2.5 μl培養(yǎng)細(xì)胞>100個(gè)

血清2.5 μl組織0.1mg

尿液2.5 μl毛發(fā)囊1-3個(gè)

血漿1 μlgDNA

1-400ng

植物葉片2mmcDNA1-400ng

植物粗提物2-4 μl質(zhì)粒0.1-10ng

單位定義

一個(gè)活力單位即在在74°C條件下，30分鐘內(nèi)催化10 nmol dNTP的摻入反應(yīng)成為酸不溶性物質(zhì)所需的酶量。

儲(chǔ)存

-20℃可保存3年。

RAPA3G DNA Polymerase試劑恒溫?cái)U(kuò)增使用策略及實(shí)例展示

應(yīng)用實(shí)例1：在以A3824-03或 A3828-03，用 LP1002引物組進(jìn)行的LAMP測(cè)試。Bst4.0 SYBR Green試劑可在標(biāo)準(zhǔn)定量PCR儀或恒溫?zé)晒鈨x上進(jìn)行反應(yīng)。以體外轉(zhuǎn)錄RNA為模板，1-6分別為1、10、100、1000、10e4和10e6Copies，NTC為ddH2O為模板。下圖為65℃反應(yīng)25min的檢測(cè)結(jié)果，可以看到檢測(cè)反應(yīng)<20min(達(dá)平臺(tái)期)。

應(yīng)用實(shí)例2： 用 LP1002引物組進(jìn)行的LAMP測(cè)試。OG變色法為終點(diǎn)變色策略，在反應(yīng)結(jié)束后，倒置反應(yīng)管，溶解管蓋上染料后，陽性樣本呈現(xiàn)出醒目的綠色，陰性表現(xiàn)出橙色，區(qū)分明顯。且該方法不受樣本類型限制，雜質(zhì)耐受性很好。以體外轉(zhuǎn)錄RNA為模板，1-6分別為1、10、100、1000、10e4和10e6Copies，NTC為ddH2O為模板。下圖為65℃反應(yīng)20min后檢測(cè)結(jié)果。

應(yīng)用實(shí)例3：A3825-01 紅黃變色反應(yīng)（肉眼觀察）

以 體外轉(zhuǎn)錄 RNA 為模板，1-6分別為1、10 、100、1000、104和106Copy，NTC為ddH2O為模板。 上圖為加樣結(jié)束反應(yīng)起

始前，下圖為 65 度反應(yīng) 30min 后。