蘋果酸脫氫酶(MDH)檢測試劑盒(OAA比色法)

蘋果酸脫氫酶(Malate Dehydrogenase, MDH)是合成蘋果酸的關鍵酶之一，催化蘋果酸和草酰乙酸(OAA)的相互轉化，

參與眾多生理代謝途徑如TCA循環C4循環脂肪酸的氧化呼吸作用氮同化等，因此MDH在植物的生長發育中發揮著重要作用，

廣泛存在于線粒體、細菌細胞膜上，為三羧酸循環中的一種酶，由于酶的來源不同，其某些性質也不盡相同，MDH在細胞多種

生理活動中扮演著重要的角色，包括線粒體的能量代謝、蘋果酸-天冬氨酸穿梭系統、活性氧代謝和抗病性等。根據不同的輔酶

特異性MDH分為NAD-依賴的MDH和NADP-依賴的MDH，細菌中通常只含有NAD-MDH，在真核細胞中NAD-MDH分布于

細胞質和線粒體中。

蘋果酸脫氫酶(MDH)檢測試劑盒(OAA比色法)檢測原理是在弱堿條件下，以草酰乙酸(OAA)作為顯色底物，

OAA在MDH催化下被NADH還原為蘋果酸(Mal)，每催化1分子OAA消耗1分子NADH，通過分光光度比色法(酶標儀)測定3

40nm處吸光度的變化，計算出NADH的消耗速率進一步推算出蘋果酸脫氫酶活性水平，主要用于檢測植物樣本、血清等中

蘋果酸脫氫酶活性。該試劑盒僅用于科研領域，不適用于臨床診斷或其他用途。

操作步驟(僅供參考)：

自備材料：

1、蒸餾水

2、電子天平、研缽或勻漿器、離心管或試管

3、低溫離心機、恒溫箱或水浴鍋、酶標儀、酶標板

操作步驟(僅供參考)：

1、準備樣品∶

①植物樣品︰取1g植物組織或水果中層果肉，加入2.5ml PAL Lysis Buffer，冰浴情況下充分搗碎研磨或勻漿，4℃ 10000r/min

離心15~20min，留取上清液，-20℃凍存，用于苯丙氨解氨酶的檢測。

②血漿、血清和尿液樣品︰血漿、血清按照常規方法制備后可以直接用于該試劑盒的測定，-20℃凍存，用于苯丙解氨的檢測。

③細胞或組織樣品∶取恰當細胞或組織裂解液，如果有必要需進行適當勻漿，4℃ 10000r/min離心15~20min，取上清液，

-20℃凍存，用于苯丙酸解氨酶的檢測。④高活性樣品︰如果樣品中含有較高活性的苯丙解氨酶，可以使用蒸餾水或PAL

Lysis Buffer稀釋進行恰當的稀釋。

2、PAL加樣∶

取96孔板，按照下表設置對照孔、測定孔，溶液應按照順序依次加入，并

注意避免產生氣泡。如果樣品中的PAL活性過高，可以減少樣品用量或適當稀釋后再進行測定，樣品的檢測最好能設置2平行孔，

求平均值。

加入物（μl）對照孔測定孔

蒸餾水150100

待測樣本5050

PAL Assay Buffer-50

3、PAL檢測︰

以對照孔為對照(調零)，酶標儀立即測定290nm處測定孔的吸光度(記為   A測定0);40℃準確孵育1h，立即加入10μl PAL終止

液終止反應(備選方案)，以對照孔為對照調零，酶標儀立即測定290nm處測定孔的吸光度(記為A測定1)。

注意︰加入PAL終止液終止反應為非必須步驟，可37℃準確孵育1h后直接以對照孔為對照調零，酶標儀立即測定290nm處測定

孔的吸光度。

注意事項∶

1、待測樣品中不能含有酶抑制劑，同時需避免反復凍融。

2、獲得上清液為PAL酶液，應盡快檢測，亦可-20°℃保存。

3、如果沒有可測定紫外區的酶標儀和酶標板，也可以使用紫外分光光度計和石英比色皿，但應注意比色杯的最小檢測體積。

4、每次檢測指標不宜過多，否則操作時間不一，有可能導致樣本間的差異。5、為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

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