(PRO)檢測試劑盒(茚三酮比色法)

(Proline，Pro)是一種環(huán)狀的α-亞氨基酸，呈中性，等電點為6.30，水中溶解度比任何氨基酸都大，25℃時100g水中可溶162g

左右，易潮解不易得結(jié)晶，有甜味。與茚三酮溶液共熱，生成黃色化合物，一旦進入肽鏈后，可發(fā)生羥基化作用，從而形4-羥，

是組成動物膠原蛋白的重要成分，羥也存在于多種植物蛋白質(zhì)中，尤其與細胞壁的形成有關(guān)，在正常情況下含量較低，

但在逆境下(旱、熱、冷、凍、鹽堿等)，常有的明顯積累，即積累指數(shù)與植物的抗逆性有關(guān)，在臨床、生物材料、

工業(yè)等方面均有廣泛應(yīng)用。

(PRO)檢測試劑盒(茚三酮比色法)檢測原理是游離于磺基水楊酸溶液中，前者與酸性茚三酮共熱發(fā)生反應(yīng)

，產(chǎn)生穩(wěn)定的紅色產(chǎn)物，以酶標(biāo)儀測定520nm處吸光度值，在一定濃度范圍內(nèi)顏色深淺與濃度成正比。該試劑盒主要用于測定

植物組織中的游離含量，僅用于科研領(lǐng)域，不宜用于臨床診斷或其他用途。

操作步驟(僅供參考)：

1、取內(nèi)徑為8mm的玻璃試管2支，分別加入白陶土-腦磷脂混懸液0.2ml。

2、靜脈采血1ml，立即取下針頭，沿管壁向各試管注入血液0.5ml，立即混勻并啟動秒表計時，并置于37℃水浴中。

3、每隔10s輕搖試管一次，觀察管內(nèi)血液流動情況，直至血液凝固。記錄血液凝固所需時間，即為ACT。

4、取2支試管血液凝固時間的平均值作為ACT 值。

計算：參考區(qū)間： (1.77±0.76)min

4、配制標(biāo)準(zhǔn)品工作液︰如果檢測血清、尿液等樣品，按取丙酮酸標(biāo)準(zhǔn)(6mg/ml):蒸餾水=1：99的比例配制，使?jié)舛冗_到60μg/ml，如果檢測組織樣品按丙酮酸標(biāo)準(zhǔn)(6mg/ml) :組織勻漿液(1×)=1:99的比例配制，使?jié)舛冗_到60μg/ml。

注意事項:

1、實驗材料應(yīng)盡量新鮮，如取材后不立即使用，應(yīng)存于-20°C.

2、實驗用蒸餾水不能含有二氧化碳，可用新煮沸且冷卻后的蒸餾水，并蓋緊口。

3、TA滴定液為堿性溶液，有腐蝕性，請小心操作。

4、TA標(biāo)定液容易長菌，宜4℃保存，一旦發(fā)現(xiàn)有絮狀物請棄用。

5、果實中含酸量較少時可將TA滴定液適當(dāng)稀釋后使用，可考慮用0.01~0.05M  TA滴定液進行滴定。

6、TA滴定液含量計算公式中，V0最好為3次空白測定的平均值。

7、如果所測樣品的濃度過高，應(yīng)用TA Lysis Buffer工作液稀釋樣品后重新測定，并將稀釋倍數(shù)帶入公式。

8、如果樣品顏色較深，滴定終點不易觀察，應(yīng)采用電位滴定法。

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