檢測試劑盒(*肼微板法)

(Pyruvic acid，PA)又稱2-氧代丙酸，是參與整個生物體基本代謝的中間產(chǎn)物之一，可通過和三羧酸循

環(huán)實現(xiàn)體內(nèi)糖、脂肪和氨基酸間的互相轉(zhuǎn)化，在三大營養(yǎng)物質(zhì)的代謝聯(lián)系中起著重要的樞紐作用。是糖無氧

代謝的產(chǎn)物，科研工作者常將丙酮酸和乳酸一起研究，并用二者的比值推算循環(huán)衰竭的程度

。丙酮酸檢測可采用乳酸脫氫酶催化法或*肼比色法。

檢測試劑盒(*肼微板法)檢測原理是在酸性條件下，與*肼反應(yīng)，生成-*

腙復(fù)合物，后者經(jīng)氧化呈棕紅色，通過酶標(biāo)儀測定520nm處吸光度，據(jù)此通過與標(biāo)準(zhǔn)曲線對比可以計算出PA水平。該試劑

盒可用于檢測植物、細(xì)胞或組織、血清等樣品中內(nèi)源性的含量，尤其適用植物樣品含量的檢測。該試劑盒僅用

于科研領(lǐng)域，不宜用于臨床診斷或其他用途。

操作步驟(僅供參考)：

1、取內(nèi)徑為8mm的玻璃試管2支，分別加入白陶土-腦磷脂混懸液0.2ml。

2、靜脈采血1ml，立即取下針頭，沿管壁向各試管注入血液0.5ml，立即混勻并啟動秒表計時，并置于37℃水浴中。

3、每隔10s輕搖試管一次，觀察管內(nèi)血液流動情況，直至血液凝固。記錄血液凝固所需時間，即為ACT。

4、取2支試管血液凝固時間的平均值作為ACT 值。

計算：參考區(qū)間： (1.77±0.76)min

4、配制標(biāo)準(zhǔn)品工作液︰如果檢測血清、尿液等樣品，按取丙酮酸標(biāo)準(zhǔn)(6mg/ml):蒸餾水=1：99的比例配制，使?jié)舛冗_(dá)到60μg/ml，如果檢測組織樣品按丙酮酸標(biāo)準(zhǔn)(6mg/ml) :組織勻漿液(1×)=1:99的比例配制，使?jié)舛冗_(dá)到60μg/ml。

注意事項:

1、實驗材料應(yīng)盡量新鮮，如取材后不立即使用，應(yīng)存于-20°C.

2、實驗用蒸餾水不能含有二氧化碳，可用新煮沸且冷卻后的蒸餾水，并蓋緊口。

3、TA滴定液為堿性溶液，有腐蝕性，請小心操作。

4、TA標(biāo)定液容易長菌，宜4℃保存，一旦發(fā)現(xiàn)有絮狀物請棄用。

5、果實中含酸量較少時可將TA滴定液適當(dāng)稀釋后使用，可考慮用0.01~0.05M  TA滴定液進行滴定。

6、TA滴定液含量計算公式中，V0最好為3次空白測定的平均值。

7、如果所測樣品的濃度過高，應(yīng)用TA Lysis Buffer工作液稀釋樣品后重新測定，并將稀釋倍數(shù)帶入公式。

8、如果樣品顏色較深，滴定終點不易觀察，應(yīng)采用電位滴定法。

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