Bst 4.0 Basic Bead試劑

Bst 4.0 Basic Bead試劑為全體系凍干微球制品，內(nèi)含恒溫?cái)U(kuò)增所用

的反應(yīng)緩沖液、Mg2+、dNTP、Bst 4.0 DNA/RNA 聚合酶

等，其不包含任何染料，使用時(shí)只需要加入引物、模板即

可進(jìn)行核酸恒溫?cái)U(kuò)增。Bst 4.0 DNA/RNA 聚合酶具有依

賴于 RNA 模板的聚合酶活性（逆轉(zhuǎn)錄），還具有依賴于

DNA 的聚合酶活性，因此無(wú)論 DNA 或 RNA 樣本均可使

用該制品進(jìn)行恒溫?cái)U(kuò)增。該制品是進(jìn)行 LAMP 及

RT-LAMP 擴(kuò)增反應(yīng)的試劑。

本制品不包含任何顯色染料，可自行搭配相關(guān)染料

或檢測(cè)手段進(jìn)行 LAMP 反應(yīng)，包括搭配 OG 染料管進(jìn)行

橙綠變色、搭配標(biāo)記 Oligo 進(jìn)行試紙條檢測(cè)、搭配熒光染

料進(jìn)行熒光檢測(cè)、搭配 Molecular Beacon 探針進(jìn)行熒光

檢測(cè)等方法。

貨 號(hào) 名 稱 規(guī)格

A3828-02 Bst4.0 Basic Bead 100 個(gè)

儲(chǔ)存：-20℃保存 2 年；室溫（25℃）保存>6 個(gè)月。

使用方法：（進(jìn)行 LAMP 橙綠變色擴(kuò)增）：

1. 關(guān)于 OG 橙綠變色管(貨號(hào)：A3828-21)說(shuō)明：橙綠變

色染料（OG Dye）以烘干的形式預(yù)加在8聯(lián)管蓋上。LAMP

反應(yīng)完畢后，將 0.2ml EP 管顛倒溶解 OG 染料后。LAMP 

的反應(yīng)產(chǎn)物將與 OG 染料形成綠色肉眼可見(jiàn)變色反應(yīng)（陽(yáng)

性），而未擴(kuò)增的 EP 管為深橙色（陰性）。本試劑管常溫

長(zhǎng)期保存。

2. 配制變色 LAMP 反應(yīng)體系

在 OG 染料管（0.2ml EP）反應(yīng)管中加入下述試劑

Bst4.0 Basic Bead 1 粒

10xLAMP Primer Mix 2.5 μl

模板 DNA/RNA X μl

ddH2O 到總體積 25 μl

10xLAMP Primer Mix 濃度：FIP/BIP 分別為 16 μM、

LoopF/B 分別為 4~8 μM、F3/B3 分別為 2 μM。

注意：全部試劑加入完畢后，輕彈 EP 管底部后，再蓋上 OG 橙

綠變色管（蓋上管蓋后務(wù)必不能再劇烈混合與倒置，以防止將管蓋

上的 OG 染料溶解，OG 染料一旦混入反應(yīng)液中將會(huì)終止 LAMP

反應(yīng)）。

3. 反應(yīng)體系配好后，置于 65°C 進(jìn)行反應(yīng) 15~30min。（擴(kuò)

增良好的引物組合，通常 20min 即可變色，一般不超過(guò)

30min）。

4. 觀察結(jié)果：反應(yīng)結(jié)束后，從加熱裝置中將反應(yīng)管取出，

室溫 2min，使整個(gè)反應(yīng)管冷卻下來(lái)。再次用力將反應(yīng)管

蓋壓緊，以防止液體泄露。將反應(yīng) EP 管倒置，并手腕輕

甩，反應(yīng)液浸泡 EP 管蓋上的 OG 染料，靜置 1min（中

間可輕彈 1-2 次，以加速溶解 OG 染料）。再將 EP 反應(yīng)

管正置，并輕甩反應(yīng)液到 EP 管底部，此時(shí)擴(kuò)增樣品將變

為鮮艷肉眼可見(jiàn)綠色，而陰性未發(fā)生擴(kuò)增的管將為深橙

色。

注意：（1）觀察結(jié)果時(shí)，盡可能不要與配制反應(yīng)空間共用，

以防止污染操作臺(tái)。（2）盡管 HaiGene 選取的為高密封

性的 EP 管，但也時(shí)有 EP 管發(fā)生液體泄露。在反應(yīng)管倒

置時(shí)，可用紙巾包裹 EP 管，一旦發(fā)生泄露，丟棄紙巾，

防止臺(tái)面污染。（3）整個(gè)操作過(guò)程，佩戴手套、口罩等個(gè)

人防護(hù)用品。

注意事項(xiàng)：

（1）關(guān)于礦物油的使用，在配制完 LAMP 反應(yīng)體系后，

可加入一滴礦物油覆蓋于反應(yīng)液上部，以減少氣溶膠的污

染。礦物油并不影響 OG 染料的溶解。

（2）在使用其它熒光染料時(shí)，使用濃度可自行優(yōu)化，通

常來(lái)講，參考供應(yīng)商提供濃度的 0.25~0.8x，過(guò)高濃度的

染料可能導(dǎo)致擴(kuò)增失敗。

（3）本試劑不支持，濁度、pH 變色、HNB 變色反應(yīng)，

請(qǐng)勿嘗試。

（4）關(guān)于 LAMP 成品試劑的建議， Bst 4.0 Basic Bead

凍干球和 OG 橙綠變色管均為室溫穩(wěn)定狀態(tài)，可長(zhǎng)期保

存。將擴(kuò)增引物加入到 OG 橙綠變色管底部，于 70°C 烘

干，再加入一粒凍干球即可制備成全體系檢測(cè)試劑。

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