試劑盒的檢測原理中，為什么選擇夾心法或雙抗體夾心法

試劑盒的檢測原理中，為什么選擇夾心法或雙抗體夾心法

在ELISA試劑盒中選擇 夾心法（或雙抗體夾心法） 作為檢測原理的主要原因如下：

1. 高特異性

雙位點(diǎn)結(jié)合：需要兩種抗體（包被抗體和檢測抗體）同時(shí)結(jié)合目標(biāo)抗原的不同表位。只有當(dāng)兩種抗體均能特異性識別抗原時(shí)才會(huì)形成“夾心"復(fù)合物。

減少交叉反應(yīng)：尤其當(dāng)其中一種抗體為單克隆抗體時(shí)（如小鼠IL-27試劑盒），可顯著降低非特異性結(jié)合的干擾。

2. 高靈敏度

信號放大作用：通過生物素-親和素系統(tǒng)（如HRP標(biāo)記鏈霉親和素）或酶標(biāo)二抗的多級放大效應(yīng)（如TMB顯色），可檢出低至pg/mL級別的目標(biāo)蛋白（如小鼠IL-27靈敏度達(dá)1.48 pg/mL）。線性范圍廣：例如人IL-27的檢測范圍為15.6–1000 pg/mL。

3. 適用于復(fù)雜樣本

無需純化抗原：即使樣本中存在雜質(zhì)（如血清中的其他蛋白），只要目標(biāo)抗原具有至少兩個(gè)結(jié)合位點(diǎn)即可被準(zhǔn)確檢出。

廣泛適用性：適用于血清、血漿、細(xì)胞上清等多種樣本類型。

4. 操作穩(wěn)定性和重復(fù)性

標(biāo)準(zhǔn)化流程：預(yù)包被的固相抗體和標(biāo)準(zhǔn)化試劑（如凍干標(biāo)準(zhǔn)品）確保實(shí)驗(yàn)條件可控。

低變異系數(shù)：例如小鼠IL-27試劑的板內(nèi)/板間變異系數(shù)均<10%。

5.與其他方法的對比優(yōu)勢

優(yōu)于直接法：直接法需直接標(biāo)記一抗且易受非特異信號干擾；而夾心法通過兩步結(jié)合提高準(zhǔn)確性。

優(yōu)于競爭法：競爭法適用于小分子半抗原（如激素），而夾心法更適合大分子蛋白（如多表位的IL-27）。

總結(jié)

選擇雙抗夾心法的核心在于其高特異性與靈敏度的平衡以及對復(fù)雜樣本的適應(yīng)性。對于多亞基或大分子蛋白（如IL-27），該方法能確保準(zhǔn)確量化目標(biāo)物質(zhì)濃度