細(xì)胞養(yǎng)不好?可能是血清沒用對! 血清使用指南請收好!

牛血清是細(xì)胞培養(yǎng)中常用的天然培養(yǎng)基，與合成的基礎(chǔ)培養(yǎng)基配合使用，一般添加使用量在10~20%，主要作用是提供細(xì)胞生長所需的營養(yǎng)物質(zhì)、激素和生長因子等。

　　養(yǎng)過細(xì)胞的小伙伴們應(yīng)該都知道：血清，由于其復(fù)雜的內(nèi)在成分和難以控制的外界因素，它既是細(xì)胞生長的營養(yǎng)，也是細(xì)胞死亡的原因

　　當(dāng)我們廢寢忘食的，嘔心瀝血的，鞠躬盡瘁的養(yǎng)著細(xì)胞同時，也極有可能因為一時的疏忽和大意選擇了品質(zhì)不好的血清，導(dǎo)致珍貴的細(xì)胞意外身外，一切歸零，不得不重頭開始!
 

　　血清質(zhì)量的差異性大

　　市場上各種血清產(chǎn)品魚龍混珠，一不小心，你可能就使用了品質(zhì)不好的血清。

　　血清按照采血時間可分為胎牛血清、新生牛血清和小牛血清，三者的優(yōu)劣順序為：胎牛血清>新生牛血清>小牛血清。

　　一般細(xì)胞建議使用胎牛血清培養(yǎng)，部分細(xì)胞可使用新生牛血清培養(yǎng)，小牛血清則不建議用于細(xì)胞培養(yǎng)。

　　血清在生產(chǎn)中受采血來源，條件和生產(chǎn)工藝等的影響，質(zhì)量差異較大，即使相同廠家不同批次的血清都會有差異;另外不同種類的細(xì)胞對血清的適應(yīng)也有不同，這可能與血清中所含的生長因子有關(guān)，所以血清在使用之前應(yīng)提前驗證一下對所培養(yǎng)的細(xì)胞生長的促進作用。
 

　　血清的正確保存及使用指南

　　1）保存：胎牛血清一般在-20℃以下冷凍保存，使用之前應(yīng)先放到2~8℃冰箱過夜溶解，不建議直接放到室溫或37℃水浴溶解(升溫過快會導(dǎo)致血清中蛋白質(zhì)大量沉淀，影響血清質(zhì)量);若一次使用量不多，可溶解后分裝至小包裝凍存，避免反復(fù)凍融。血清解凍后在2~8℃保存時間一般不超過一個月。

　　2）滅活：一般血清使用時不需要滅活。滅活的作用是消除血清中的各種補體成分，但事實證明血清滅活之后會產(chǎn)生大量的沉淀，會對血清的營養(yǎng)物質(zhì)造成較大破壞，對細(xì)胞的生長不利。

　　3）沉淀：血清中的沉淀一般為析出的纖維蛋白，另外新生牛血清中各種蛋白含量明顯偏高，溶解時較易產(chǎn)生大量沉淀。血清中出現(xiàn)沉淀一般不會影響血清質(zhì)量，并且升溫至37℃時會溶解(不建議加熱血清);若沉淀量較多，可在400×g離心3min，取上清使用。血清和添加了血清的培養(yǎng)基在使用時不需要過濾。
 

　　血清使用中的一些問題

　　1）如何更換使用血清？

　　需要更換使用不同品牌或批次的血清之前，需提前對要使用的血清進行驗證，可使用自己經(jīng)常培養(yǎng)的細(xì)胞進行，保證該血清對細(xì)胞生長的促進作用。在更換使用時可以將要更換的血清和原本使用的血清1:1混合使用1~2代，待細(xì)胞適應(yīng)后進行更換。

　　2） 血清顏色的問題

　　血清顏色主要是黃色或紅色，一般淡黃色或微紅色為正常。這個主要受血紅蛋白含量的影響，若顏色太深(接近培養(yǎng)基的顏色)，則有可能是采血過程中出現(xiàn)溶血導(dǎo)致的。

　　3）血清沉淀的問題

　　血清中的沉淀主要是纖維蛋白凝集產(chǎn)生的，一般來說每次凍融都會產(chǎn)生一部分的沉淀，但不影響血清質(zhì)量和使用。另外，血清在加入到培養(yǎng)基中后也是有可能會產(chǎn)生沉淀的，特別是滅活后的血清，會持續(xù)產(chǎn)生黑色顆粒，這可能會被錯誤判斷為污染。一般血清產(chǎn)生的沉淀在顯微鏡下觀察為微小的不規(guī)則絮狀或者顆粒物質(zhì)，排查是否為污染辦法是用瓊脂板檢測。
 

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　　1，低內(nèi)毒素，無細(xì)菌、支原體、噬菌體、病毒等污染;

　　2，無外源添加因子，不含激素、抗生素等;

　　3，已通過細(xì)胞庫中300多種細(xì)胞株和近百種原代細(xì)胞的驗證;

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　　溫馨提醒：

　　沒有一種血清可以滿足所有細(xì)胞生長所需，在換血清品牌，或者同一品牌換批次時都要做好驗證工作，相對來講批次間差距越小越好，不為品牌，不為價格，只買對的。

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