胞核胞質(zhì)如何分離

伴隨著細(xì)胞功能研究的深入，亞細(xì)胞結(jié)構(gòu)分離成為許多研究成功的關(guān)鍵。隨著表觀遺傳學(xué)的發(fā)展，更多的機(jī)理性研究聚焦于細(xì)胞核內(nèi)的物質(zhì)分子，比如組蛋白、細(xì)胞內(nèi)的核酸以及其它酶類。越來(lái)越多的實(shí)驗(yàn)需要分離出可供后續(xù)研究所需細(xì)胞核內(nèi)蛋白用于定量分析或者活性測(cè)定，僅使用總蛋白分析是無(wú)法滿足實(shí)驗(yàn)要求的。
例如：
目標(biāo)蛋白的表達(dá)量不高，用總蛋白不易檢測(cè)。
研究目標(biāo)蛋白定位及組分間表達(dá)量對(duì)比檢測(cè)。
轉(zhuǎn)錄調(diào)控方面的研究。
分子生物學(xué)研究的起始原料。
都需要通過(guò)胞質(zhì)胞核分離實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證，通常胞質(zhì)胞核分離的方法是繁雜冗長(zhǎng)的，下游的交叉污染又很高，今天英文特就為大家介紹兩款核蛋白研究方便又實(shí)用的工具。

工具一

SC-003  Minute^TM胞質(zhì)胞核分離試劑盒

         

處理樣品：動(dòng)物細(xì)胞，原生質(zhì)體（植物，細(xì)菌，酵母，真菌）

下游應(yīng)用：SDS-PAGE，WB，ELISA，IP，CO-IP，蛋白定位，凝膠遷移分析（EMSA），2D等。

操作時(shí)間：15分鐘

特點(diǎn)：優(yōu)化的裂解液及柱式法配合提取，操作快捷，交叉污染低

參考文獻(xiàn)：

DOI: 10.1016/j.biopha.2018.02.034

▲Cytoplasmic and nuclear fractionation kit was used to obtain the cytosolic and nuclear protein. LMNA and GAPDH were considered as nuclear and cytosolic loading control, respectively. And bands were quanti?ed. CE, Cytosolic extract. NE, nuclear extract.

▲Western blotting was used to evaluate the subcellular localization of HNF1a or HNF1aQ511L in Huh-7 cells. CE, cytoplasmic extract; NE, nuclear extract.

doi: 10.1073/pnas.1700909114

▲Immunoblot analyses of the indicated proteins in cytoplasmic extracts and nuclear extracts from IECs stimulated with TNFα

doi: 10.1002/hep.28887

工具二

NT-032 Minute^TM新鮮/冷凍組織胞質(zhì)胞核分離

處理樣品：新鮮/冷凍動(dòng)物組織

下游應(yīng)用：SDS-PAGE，WB，ELISA，IP，CO-IP，蛋白定位，凝膠遷移分析（EMSA），2D等。

操作時(shí)間：30分鐘

特點(diǎn)：新鮮，冷凍組織樣品均可使用，交叉污染低。