胰酶消化步驟以及注意事項

胰酶消化步驟以及注意事項

常規(guī)細胞培養(yǎng)實驗過程中，貼壁細胞的傳代培養(yǎng)、凍存保種，都離不開胰酶消化，如何將細胞完好的消化下來，則依賴于對胰酶的優(yōu)先選擇以及操作手法。

01關于胰酶

胰酶全稱胰蛋白酶（Trypsin），是胰臟中提取的一種絲氨酸蛋白水解酶，主要作用是使細胞間的蛋白質(zhì)（如細胞外基質(zhì)）水解，改變細胞間的連接，使貼壁細胞從瓶壁上脫落并分離單個的細胞。

消化步驟

01去掉培養(yǎng)液，用無菌的PBS、Hanks液或無血清培養(yǎng)液洗滌細胞一次，以去除殘余的血清。

02加入少量胰酶細胞消化液，略蓋過細胞即可，根據(jù)胰酶效率差異可以增加或減少用量。在室溫下放置30秒至2分鐘（不同的細胞的消化時間也不同）

03肉眼觀察瓶壁由半透明（細胞單層連接成片，如磨砂玻璃）轉(zhuǎn)為透明、點狀（出現(xiàn)細小空隙）時，或看見培養(yǎng)瓶壁呈白茫狀即可。

04此時吸除胰酶細胞消化液。加入含血清的細胞培養(yǎng)液，吹打下細胞，即可直接用于后續(xù)實驗如果發(fā)現(xiàn)消化不足，則加入胰酶細胞消化液重新消化。

注意事項

1、如果發(fā)現(xiàn)細胞消化時間過長，未及吹打細胞，細胞已經(jīng)有部分直接從培養(yǎng)器皿底部脫落（如見大量細胞片狀脫落，就是消化過頭了），直接用胰酶細胞培養(yǎng)液把細胞全部吹打下來。1000-2000g離心1分鐘，

沉淀細胞，盡量去除胰酶細胞消化液后，加入含血清的培養(yǎng)液重新懸浮細胞，即可用于后續(xù)實驗。

2、影響消化速度的因素較多，主要有胰酶溶液的活性、消化時的溫度以及所加胰酶量等 。