流式抗體（熒光抗體）細(xì)胞染色步驟與注意事項(xiàng)

流式抗體（熒光抗體）細(xì)胞染色步驟與注意

染色緩沖液（BSA）的配制：

PBS含有1% FBS和0.09% NaN3，置于冰上或4度冰箱備用。

準(zhǔn)備單細(xì)胞懸液：淋巴組織、骨髓、血液或培養(yǎng)的細(xì)胞。

用冰染色緩沖液洗細(xì)胞2次，離心細(xì)胞，用冰染色緩沖液重懸細(xì)胞，使終濃度為2×107細(xì)胞/ml。

各取50ul（106細(xì)胞）細(xì)胞懸液到2個(gè)圓底的Ep管中。

根據(jù)抗體說(shuō)明書(shū)在其中1個(gè)Ep管中加入合適的抗體量，另外1個(gè)加入同型對(duì)照抗體，冰上避光孵育20分鐘（建議每5分鐘輕輕混勻，以免細(xì)胞沉積）。根據(jù)熒光抗體的親和力適當(dāng)延長(zhǎng)染色時(shí)間。

用1ml染色緩沖液洗2次去除未結(jié)合的抗體，300×g離心5分鐘，每次離心后小心吸取上清。

用適量染色緩沖液（如500ul）重懸細(xì)胞。

流式細(xì)胞儀分析染色結(jié)果（不超過(guò)4小時(shí)）。如果暫時(shí)無(wú)法檢測(cè)，也可以將染色后的細(xì)胞用4%多聚甲醛固定后，避光儲(chǔ)存在4度。固定后的細(xì)胞可以保存zui多一個(gè)星期。