可滴定酸(TA)檢測試劑盒(滴定法)説明書

可滴定酸(TA)檢測試劑盒(滴定法)

產品簡介：

有機酸存在于多種生命體中，植物組織或果實中有機酸種類和數量因植物組織或果實種類和品種而異，進而影響果實的口味、酸糖比、耐儲性，植物組織或果實中含有蘋果酸、檸檬酸、酒石酸、草酸等多種有機酸。

雅吉生物可滴定酸(TA)檢測試劑盒(滴定法)又稱有機酸檢測試劑盒，檢測原理是根據酸堿中和原理進行的，即用已知濃度的氫氧化鈉溶液滴定待測樣品,根據氫氧化鈉的消耗量計算待測樣品中可滴定酸的含量，主要用于定量檢測植物組織或果實中可滴定酸(如蘋果酸、檸檬酸、酒石酸、草酸等)的含量，該50T試劑盒可以檢測約47~48次樣本。

該試劑盒僅用于科研領域，不適用于臨床診斷或其他用途。

產品組成：

自備材料：

1、實驗材料∶桃子、李子、蘋果、杏等果實或其他植物組織

2、研缽或勻漿器、濾紙或紗布

3、離心管或試管、三角瓶、滴定管、容量瓶

4、水浴鍋、離心機

5、pH計、藍色石蕊試紙

6、滴定分析用蒸餾水(無CO_2，無 NH₃ ) 

操作步驟(僅供參考)：

1、配制TA Lysis Buffer工作液：取適量的TA Lysis Buffer(10×)，

按TA Lysis Buffer(10×)︰蒸餾水=1∶9的比例混合，即為TA Lysis Buffer工作液。

2、準備樣品︰取果實或其他植物組織，洗凈，擦干，稱取剪碎的新鮮樣品5g，置于研缽或勻漿器，加入10ml TA Lysis Buffer 工作液，充分研磨或勻漿后轉入三角瓶，用少量TA Lysis Buffer工作液沖洗研缽或勻漿器，一并轉入三角瓶，補加TA Lysis Buffer工作液約30ml ,混勻，(置于80℃恒溫水浴鍋)靜置浸提30min，期間攪拌數次。(冷卻后)用濾紙或紗布過濾(也可4000r/min離心10min),留取濾液(或上清液)轉入50ml容量瓶中，用TA Lysis Buffer 工作液沖洗殘渣2~3次，合并濾液并定容至50ml，充分混勻，即為可滴定酸提取液，4℃保存待用。

3、標定TA滴定液：取20ml TA標定液，滴加5OμL酚酞指示劑，用TA滴定液(0.1 mol/L)滴定至溶液呈粉紅色；按如下公式計算TA滴定液準確濃度:

TA滴定液準確濃度(nb ,mol/L)=0.24/(TA滴定液所用毫升數×0.2042)

4、滴定測定∶取10ml可滴定酸提取液加至三角瓶，滴加50μL酚酞指示劑，用已經標定好的TA滴定液進行滴定至溶液初現粉紅色并在0.5min內不褪色為終點，記錄TA滴定液的用量；以TA Lysis Buffer工作液代替可滴定酸提取液進行滴定，作為空白對照。

計算︰

根據TA滴定液消耗量，計算樣品中可滴定酸含量，以百分比表示。

計算公式如下∶

可滴定酸含量(%)={V×nb×f×(V₁-V₀)×100%}/(W×V_S)

100g 樣品鮮重中可滴定酸含量(g/100g)={V×nb×f×(V₁-V₀)×100}/(W×V_S)

式中:

V=樣品提取液的總體積(ml)

nb=標定后的TA滴定液摩爾濃度(mol/L= mmol/mL)

V₁=滴定提取液所用的TA滴定液的體積(ml)

V₀=滴定蒸餾水所用的TA滴定液的體積(ml)

W=樣品鮮重(g)

V_S=滴定時所取濾液(可滴定酸提取液)的體積(ml)，

本實驗中V_S=10ml

f=折算系數(1mmol TA滴定液換算為有機酸克數的系數，g/mmol)

幾種常見有機酸的換算系數

注意事項:

1、實驗材料應盡量新鮮，如取材后不立即使用，應存于-20°C.

2、實驗用蒸餾水不能含有二氧化碳，可用新煮沸且冷卻后的蒸餾水，并蓋緊口。

3、TA滴定液為堿性溶液，有腐蝕性，請小心操作。

4、TA標定液容易長菌，宜4℃保存，一旦發現有絮狀物請棄用。

5、果實中含酸量較少時可將TA滴定液適當稀釋后使用，可考慮用0.01~0.05M  TA滴定液進行滴定。

6、TA滴定液含量計算公式中，V₀最好為3次空白測定的平均值。

7、如果所測樣品的濃度過高，應用TA Lysis Buffer工作液稀釋樣品后重新測定，并將稀釋倍數帶入公式。

8、如果樣品顏色較深，滴定終點不易觀察，應采用電位滴定法。 

有效期∶6個月有效，4C保存。 

附錄:

如果提取液顏色影響滴定終點的確定，可在藍色石蕊試紙上加1滴蒸餾水和1滴提取液，當試紙不再變紅時為終點；除此之外還可用pH計測定，以避免提取液顏色對確定終點的影響；其方法如下∶將pH計的電極進入提取液中，邊攪拌邊滴加TA滴定液，記錄pH的變化，以滴加滴定液的體積為橫坐標，pH為縱坐標，制作酸堿滴定曲線，滴定曲線的兩個“滴定拐點"間的中點即為滴定終點。

有些果蔬樣品提取液滴定至近終點時出現黃褐色，這時可加入提取液體積的1~2倍熱水稀釋，加入酚酞指示劑0.5~1ml，再繼續滴定，使酚酞變色易于觀察。 

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