鐵檢測試劑盒(亞鐵嗪微板法)操作流程説明

鐵檢測試劑盒(亞鐵嗪微板法)

產(chǎn)品簡介：

鐵是人體必需微量元素，總含量約為3270mg，鐵分布較廣，有67.6%的鐵作為血紅蛋白分子的輔基分布于血紅蛋白中，參與鐵的運輸﹔骨骼和肌紅蛋白中各存在2.59%和4.15%，儲存鐵約占25.37%血清中鐵均以三價鐵離子形式與轉(zhuǎn)鐵蛋白結(jié)合，因此測定血清鐵時，首先需要Fe³⁺與轉(zhuǎn)鐵蛋白分離。

雅吉生物鐵檢測試劑盒(亞鐵嗪微板法)是采用分光光度法以亞鐵嗪為底物進行鐵的檢測，在酸性介質(zhì)中與轉(zhuǎn)鐵蛋白結(jié)合的血清鐵從轉(zhuǎn)鐵蛋白中解離出來，其他樣品中的鐵在酸性介質(zhì)環(huán)境下也會被解離，再被還原劑還原為Fe²⁺，后者與亞鐵嗪生成紫紅色化合物，通過酶標(biāo)儀檢測562nm處吸光度，適用于檢測血清、血漿、組織等樣品中的鐵含量;上述檢測方法屬于直接檢測法，應(yīng)設(shè)血清空白，糾正血清本身的色度，根據(jù)公式計算出鐵含量，該檢測試劑盒在140μmol/L以下線性關(guān)系良好,甘油三脂≤3.39mmol/L膽紅素≤171μmol/L ,對本法基本無干擾。

該試劑盒僅用于科研領(lǐng)域，不適用于臨床診斷或其他用途。

產(chǎn)品組成：

自備材料：

1、酶標(biāo)儀、96孔板

操作步驟(僅供參考)：

1(選做)制備樣品︰

①漿、血清樣品︰血漿、血清按照常規(guī)方法制備，-20℃凍存，用于Fe的檢測。

②細胞或組織樣品︰取恰當(dāng)細胞或組織進行勻漿，低速離心取上清，-20℃凍存，用于Fe的檢測。

③高濃度樣品︰如果樣品中含有較高濃度的Fe，可以使用ddH₂O稀釋，不宜使用普通蒸餾水稀釋。

④(選做)樣品準(zhǔn)備完畢后可以用BCA蛋白濃度測定試劑盒測定蛋白濃度，以便于后續(xù)計算單位蛋白重量組織或細胞內(nèi)的Fe含量。

2、制備鐵標(biāo)準(zhǔn)工作液︰取適量的鐵標(biāo)準(zhǔn)(100μg/ml)，按鐵標(biāo)準(zhǔn)(100μg/ml):鐵標(biāo)準(zhǔn)稀釋

液=1:49的比例配制鐵標(biāo)準(zhǔn)(2μg/ml)，即為鐵標(biāo)準(zhǔn)工作液;4℃避光保存，3個月有效。

2、Fe加樣:選用經(jīng)稀鹽酸處理及去離子水清潔的96孔板，按照下表設(shè)置空白孔、標(biāo)準(zhǔn)孔、測定孔，溶液應(yīng)按照順序依次加入，并注意避免產(chǎn)生氣泡﹔如果樣品中的鐵離子含量過高，可以減少樣品用量或適當(dāng)稀釋后再進行測定，樣品的檢測最好能設(shè)置平行孔。

4、Fe檢測︰混勻，室溫靜置15min或37℃孵育10min，以空白孔調(diào)零，酶標(biāo)儀562nm處檢測標(biāo)準(zhǔn)孔、測定孔的吸光度(即為A_{標(biāo)準(zhǔn)}，A_測定)，1h內(nèi)比色完畢。

計算:

血漿、血清鐵(μmol/L)={[A_測定一(A_血清空白×0.97)]/A_{標(biāo)準(zhǔn)}×35.8

組織鐵(μmol/g)={[A_測定-(A_血清空白×0.97)]/A_{標(biāo)準(zhǔn)}×35.8/待測樣本蛋白濃度(g/L)

式中:

A_測定=測定孔加入亞鐵嗪顯色液后測得的吸光度

A_血清空白=測定孔未加入亞鐵嗪顯色液前測得的吸光度

A_{標(biāo)準(zhǔn)}=標(biāo)準(zhǔn)孔的吸光度

單位換算∶鐵標(biāo)準(zhǔn)(2μg/ml)=鐵標(biāo)準(zhǔn)(35.8μmol/L)

μg/dl=μmol/L/0.179

μmol/L=0.179*μg/dl=17.9*μg/ml

參考區(qū)間∶

成年健康人血清鐵∶

男性:11~30μmol/L(60~170μg/dl)

女性:9~27μmol/L(50~150μg/dl)

注意事項∶

1、溶血樣本對檢測有干擾，盡量避免采用溶血樣本。

2、如果樣品濃度過高，應(yīng)用蒸餾水稀釋后重測，結(jié)果乘以稀釋倍數(shù)。

3、實驗過程中用到的水，不可用普通的蒸餾水，盡量采用高純度的去離子水。4、玻璃器材需要10%的鹽酸浸泡24h，取出后用去離子水沖洗后才可以使用。5、避免與鐵器接觸，以防鐵污染。

6、標(biāo)準(zhǔn)品呈色24h穩(wěn)定，血清呈色30min內(nèi)穩(wěn)定，隨著時間的延長，顏色會慢慢加深，應(yīng)在1h內(nèi)比色完畢。

7、0.97是體積校正值。

8、該法批內(nèi)差異CV≤3.1%;批間差異CV≤2.6%。

有效期∶6個月有效﹔常溫運輸，4C保存。